如何利用RG3000和MX3000P两款荧光定量pcr仪进行相对定量数据分析
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/27 10:04:14
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如何利用RG3000和MX3000P两款荧光定量pcr仪进行相对定量数据分析
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(1)分页:将不同的引物(基因)分在不同的页;(2)将来自相同模板的名字一样,可以定义为1234...;例如:P1(引物)P2P3P4WT:calibratorActin(1)A(1)B(1)C(1)MT1:unknown1Actin(2)A(2)B(2)C(2)MT2:unknown2Actin(3)A(3)B(3)C(3) 说明:(1)P1:引物1,扩增相同的基因;(2)WT:calibrator 对照组样本,例如:野生型WT(Wild type);(3)MT:unknown 未知组样本或处理组样本或待测组样本,例如突变型MT(Mutant type).数据分析时,选用Quantation 直接出原始图;选用2-△△Ct方法,然后根据提示选择:Analysis - Others - Delta Delta CT Relative Quatatition - validation performed、Gene Interest Quantitation 、Normalizer Quantitation 和Calibrator Defined 出相对定量柱状图;选择2 Standard Curves Relative Quantitation ,然后根据提示选择:Gene Interest StandardCurve、Normalizer Stard Curve和Calibrator Defined 出相对定量柱状图.2、MX3000P荧光定量PCR仪:软件:MxPro根据样本来源和待扩增基因分类如下:Assoc.symbolSample:样本来源NormalizerGene of InterestGene of InterestAWT(Calibrator对照组)ActinGene1Gene2BMT1 (unknown1待测组)ActinGene1Gene2CMT2 (unknown2待测组)ActinGene1Gene2DMT3 (unknown3待测组)ActinGene1Gene2EMT4 (unknown4待测组)ActinGene1Gene2操作步骤:进入软件主页 --- 选择“comparative quantitation” --- well type 选择(Calibrator:如WT;Unknown:如MT)--- 选择:sybr / reference:rox --- 选择Normalizeing assay(看家/内参基因组) --- 然后将选择Assoc.symbol将相同样本来源的样品孔绑定起来;扩增程序设计;结果分析:选定Calibrator 和 Unknown组的内参基因和感兴趣基因,结果分析即可得到柱状图.